小菜蛾血淋巴蛋白质双向电泳技术体系的建立及优化

采用不同方法对小菜蛾plutellaxylostella(l.)血淋巴进行双向电泳研究，建立了一套适用于小菜蛾血淋巴蛋白质组分析的双向电泳体系。从样品处理方案、等电聚焦时间、染色方法等因素对小菜蛾双向电泳结果的影响进行了分析和优化。结果表明，tca/丙酮沉淀法提取蛋白损失少，图谱均匀清晰，分辨率和重复性更高。不同长度胶条的最佳上样量不同，胶条长度为7、17、24cm时，最佳上样量依次为20~50μg、50~300μg、100~500μg，而聚焦时间则分别以24000、50000、65000vhr为宜。第二向聚丙烯酰胺凝胶的浓度以12%为宜，电泳后蛋白点呈均匀分布。银染的灵敏度明显高于考马斯亮蓝染色，可以检测出更多的蛋白点，但考马斯亮蓝染色在后续蛋白点质谱鉴定中具有优势。