桔小实蝇幼虫总蛋白双向电泳技术体系的建立和优化

【目的】建立和优化桔小实蝇幼虫bactroceradorsalis(hendel)总蛋白的双向电泳条件。【方法】使用bpp法和3种tca-丙酮法(tca-丙酮-a法：直接加入裂解液磨样；tca-丙酮-b法：样品提取液中加入40mmol/ldtt；tca-丙酮-c法：样品提取液中加入0.07%β-巯基乙醇)提取桔小实蝇幼虫总蛋白；使用13cm和24cmph4~7的ipg胶条分离桔小实蝇幼虫总蛋白；使用考马斯亮蓝法及硝酸银染色法对双向电泳凝胶进行染色；使用5800maldi-tof-tofms/ms质谱分析仪对bpp法获得的特异蛋白进行质谱鉴定，并将检索数据库物种分别设为metazoa(animals)与drosophila(fruitflies)进行数据库检索。【结果】tca-丙酮法中，tca-丙酮-c法提取效果最好，bpp法优于所有tca-丙酮法；使用考马斯亮蓝染色与硝酸银染色效果相当；使用24cm胶条的蛋白分辨率明显高于13cm胶条；检索数据库物种设为metazoa(animals)可获得比drosophila(fruitflies)更加全面的信息。【结论】使用24cmph4~7的ipg胶条对bpp法提取的桔小实蝇幼虫总蛋白进行双向电泳，采用考马斯亮蓝法对双向电泳凝胶进行染色，可得到更好的双向电泳图谱，检索数据库时检索物种可优先设为metazoa(animals)。