Coloración de azul de metileno como alternativa para determinar la viabilidad de larvas libres de Trichinella spiralis Methylene blue test for the determination of viability of free larvae of Trichinella spiralis

El objetivo de la presente investigación fue determinar si la coloración con azul de metileno, de probada utilidad para demostrar la viabilidad de protoescólices de Echinococcus granulosus, puede evidenciar también la viabilidad de larvas libres de Trichinella spiralis. Para ello se utilizaron tres suspensiones de larvas de T. spiralis (M1, M2 y M3), las que fueron expuestas a diferentes condiciones y observadas a distintos tiempos: M1 se expuso a -30 °C y se observó a los 70 días; M2 a 80 °C durante 5 minutos y se observó inmediatamente, y M3 se mantuvo a 4 °C durante todo el experimento, como testigo del 100% de vitalidad. Cada suspensión contenía 500 estadios larvarios libres. Se emplearon 100 μl de solución de azul de metileno 1:10 000 en agua destilada, agregados a igual volumen de suspensión de larvas, y las muestras fueron observadas al microscopio óptico para evaluar la motilidad. Los resultados evidenciaron que cuando las larvas de T. spiralis estaban muertas (M1 y M2), el 100% se coloreaban totalmente de azul en su interior, y las estructuras internas, en relación con la capa quitinosa, aparecían retraídas y algunas fragmentadas. En la suspensión testigo M3 las larvas no se coloreaban, y como prueba adicional de viabilidad se pudo observar su típico movimiento en espiral en el 100% de ellas. The present research was carried out with the purpose of determining whether or not the methylene blue test could also evidence viability of free larvae of Trichinella spiralis, taking into account its usefulness in the determination of viability of protoscolices in Echinococcus granulosus. To this end, three T. spiralis larval suspensions (M1, M2 and M3) were used, each containing 500 free larval stages. A hundred μl of methylene blue solution 1:10000 in distilled water were added to 100 μl of the larval suspension. Larvae were observed under optical microscopy to evaluate motility. M1 was exposed to -30 °C and could be observed on day 70, M2 was exposed to 80 °C during 5 minutes and it was immediately observed under optical microscopy, and M3 was maintained at 4 °C during the experiment as a 100% viability testing. Our results indicated that when T. spiralis larvae took up 100% of the methylene blue stain (M1 and M2), their inner structures appeared not only retracted but also stained blue, whereas in the M3 suspension test, larvae remained unstained and 100% of them showed their typical spiral-like movement.