Analysis of the related substances in phosphorothioate antisense oligonucleotide FT19
硫代反义寡核苷酸药物FT19有关物质的分析

为了进行硫代反义寡核苷酸药物FT19的质量控制研究，建立了用阴离子交换高效液相色谱（AX-HPLC）和毛细管凝胶电泳（CGE）分析自行合成的FT19有关物质的方法。设计合成了FT19的硫代不完全序列（P=O）1和短序列（n-x）并将它们作为已知杂质。在AX-HPLC上，使用的分析柱为DNAPacPA-100（4mm×250mm）；流动相A为10mmol/LNaOH-0.1mol/LNaCl，流动相B为10mmol/LNaOH-3mol/LNaCl；梯度洗脱条件为流动相B液在8min内从60%升至100%；流速1mL/min；柱温40℃；检测波长为260nm。CGE所用毛细管规格为内径100μm，总长度为31cm，有效长度为20cm；电泳缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷（Tris）-硼酸-7mol/L尿素，pH8.5；采用电动进样，进样电压-10kV；分离胶为250g/L的聚丙烯酰胺；检测波长为254nm。结果表明，FT19与硫代不完全的（P=O）1序列在AX-HPLC上能够达到基线分离，与短序列（n-1）在CGE上能达到基线分离。说明AX-HPLC和CGE联合应用能够很好地分析FT19中的有关物质。