免疫亲和色谱特异性剔除中药方剂四逆散中的柚皮苷

为了获得剔除柚皮苷（naringin）的中药方剂四逆散样品以供其药理活性探讨时使用，制备了抗柚皮苷抗体的免疫亲和色谱柱，用于特异性地剔除四逆散中的柚皮苷。首先合成了柚皮苷的完全抗原——柚皮苷与牛血清白蛋白的结合物naringin—BSA，并用naringin—BSA对新西兰兔进行免疫获得抗血清，再将其纯化后与经CNBr活化的Sepharose 4B凝胶共价偶联制成免疫亲和色谱柱。将四逆散提取物样品溶液上样该色谱柱，洗脱，制得特异性剔除了柚皮苷的四逆散样品。由检测结果可知，naringin—BSA被成功合成。将其用于免疫新西兰兔，获得的抗血清的效价经酶联免疫吸附法（ELISA）测定达到1：30000，抗体IgG的纯度达94％，交叉反应率低。在IgG与Sepha—rose4B合成的IgG—Sepharose免疫亲和色谱柱中，IgG的偶联率为87％。用该免疫亲和色谱柱处理四逆散后，其中所含的柚皮苷几乎完全被剔除。结果证明，利用抗柚皮苷免疫亲和色谱，能特异性地剔除四逆散或其他样品中的柚皮苷成分。