利用细菌冰核基因构建促冻杀虫基因工程菌

冰核细菌是自然界中冰核活性最强的异源冰核(-1~-5℃),已成为一种重要的生物资源.大量研究证明,利用冰核细菌促冻杀虫在理论上已确凿无疑,但难以应用野生型冰核细菌冻杀田间和仓储越冬害虫,其因有二:其一,野生型冰核细菌不能在昆虫肠道内长期稳定增生定殖,易被排泄体外而丧失冻杀效果;其二,这些冰核细菌在植物体上附生定殖能力强,田间施用后易诱发霜冻害.为解决这些阻碍促冻杀虫应用中的难题,利用自行分离的细菌冰核基因iceA,构建了携带该基因、能进行接合转移和Tn5转座作用的工程质粒mob-Tn5-iceA,又利用该工程质粒将冰核基因iceA整合到阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)染色体DNA上,成功地构建了在无选择压力下冰核基因仍稳定存在并有效表达冰核活性的促冻杀虫基因工程菌.经应用实验证明,解决了阻碍促冻杀虫应用中的难题,为防治我国三北地区农林果树和仓储主要越冬害虫,开辟了一条生防新途径.