Isolation and screening of microsatellite DNA markers from silver-lip pearl oyster Pinctada maxima
大珠母贝微卫星DNA标记的分离与筛选

采用生物素标记的(CA)15探针和磁珠富集法构建了大珠母贝(Pinctada maxima)微卫星DNA文库,随机挑选1200个菌落,经PCR筛选得到298个候选克隆,成功测序246个, 分析获得251个微卫星序列,其中完美型、非完美型和混合型分别占63%、32%和5%。除探针中使用的CA重复外, 还得到AT、GT、TC、AG、GC、TAA、CAA、AGG、GATA、GACA、GTGC、CGTC、GACG、CTGT等重复序列。设计引物90 对, 挑选其中30对合成并筛选出21 对能在大珠母贝基因组有效扩增的引物。种群PCR扩增后利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测, 获得了10个多态位点, 共检测出59个等位基因, 片段长度范围为133～444 bp。各位点等位基因数2～8 个, 平均等位基因数5.9个; 有效等位基因数为1.342 3～6.000 0, 平均为4.124 0; 多态性信息含量(CPI)为0.222 5～0.811 8, 平均0.7179; 期望杂合度(He)为0.259 3～0.847 5, 平均0.717 9; 观测杂合度(Ho)为0.300 0～0.800 0, 平均0.533 3。这些微卫星多态性标记的获得, 为进一步开展大珠母贝遗传育种、保护生物学和种群遗传多样性等研究奠定了一定基础。