Using two-hybrid yeast technique to construct the recombinant estrogen-related receptor (ERR) yeast
酵母双杂交技术构建重组雌激素受体相关受体(ERR)基因酵母

应用酵母双杂交技术构建重组雌激素受体相关受体（ERR）基因酵母，用以筛选环境中具有ERR干扰活性的化合物。提取并纯化含有ERRγ基因的酵母表达质粒pGBT9-ERRγ，称为诱饵质粒；提取并纯化含有ERRγ协同激活因子GRIP1基因的酵母表达质粒，形成靶质粒pGAD424-GRIP1; 诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187，于营养缺陷型培养基（SD/-Trp/-Leu）上筛选阳性菌落，构建ERRγ-GRIP1双杂交酵母。考察ERRγ-GRIP1酵母与典型的雌激素拮抗剂，4-羟基他莫西酚（4-OHT）的结合情况。结果表明：4-OHT能够抑制ERRγ-GRIP1酵母酶活性，并存在显著的剂量－效应关系，RIC50值为7.9×10-6 mol/L。进一步建立了检测环境化合物诱导/抑制ERRγ-GRIP1酵母β-半乳糖苷酶活性的实验方法，用于检测典型的内分泌干扰物，双酚A（BPA）。实验结果表明BPA不能诱导/抑制ERRγ介导的酶活性，但是BPA与4-OHT共同暴露时，能够修复4-OHT的抑制活性；经体外代谢活化后，BPA的修复活性得到加强。证实了该重组基因酵母用于环境污染物内分泌干扰效应筛选的可行性。