DEVELOPMENT AND APPLICATION OF AN ANTIBODY CHIP IN ON-SPOT DETECTION OF AQUATIC ANIMAL VIRUSES
一种水产动物病毒现场检测免疫芯片的制备与应用

采用原子力显微镜对氨基化玻片及 6 种不同方法修饰玻片进行表面特征分析, 并比较了硝酸纤维素(NC)膜、PVDF 膜以及以上不同修饰玻片对抗体的固定效率、固定效果, 最终选择琼脂糖修饰玻片作为芯片载体。将纯化后的兔抗血清(捕获抗体)点样至琼脂糖修饰玻片上, 制备免疫芯片, 与待检样品(病毒感染的靶器官组织)匀浆液孵育形成复合物, 该复合物被辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性单克隆抗体(单抗)识别, 经底物显色, 得到肉眼可见的检测结果。通过改变芯片制备及应用过程中的具体条件参数, 对各条件进行了优化, 并采用生物素-链亲和素(BAS)标记特异性单抗作为检测抗体以提高检测灵敏度。基于此夹心免疫分析原理制备的 WSSV、LCDV 现场检测免疫芯片, 病毒的最低检出量分别为 82.50 ng/ml、0.88 μg/ml, 在一定的抗原浓度范围内, 病毒浓度的对数值与信号强度呈线性关系; 采用 BAS 放大检测信号后, 病毒的最低检出量为 12.38 ng/ml、0.22 μg/ml。该免疫芯片与酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫荧光法(IFAT)对同种样品的检测结果高度一致。