CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF THE FULL-LENGTH rbcL GENE FROM ULVA LINZA
长石莼(缘管浒苔)(Ulva linza) rbcL全长基因的克隆与序列分析

克隆分离了长石莼(缘管浒苔)光合作用第一关键酶 Rubisco 大亚基全长基因(rbcL)。首先应用 PCR 和 RT-PCR 方法扩增 rbcL 大片段 DNA 序列和大片段 cDNA 序列, 结果表明, 获得的 2 个克隆序列完全相同, 该 rbcL 大片段基因不存在内含子。其次应用基因步移方法分别对 rbcL 基因的 5′上游未知序列和 3′下游未知序列进行扩增, 在此基础上, 将 3 个片段序列进行拼接, 获得了rbcL 全长基因序列(NCBI 登陆号: DQ813497)。序列全长 2124bp, 其中编码区序列长 1425bp, 为单外显子基因, 编码 474 个氨基酸; 5′非翻译区序列长 225bp, 转录起始位点为位于翻译起始密码子 ATG 上游第47 个核苷酸 G, 在距离转录起始位点?9bp—?48bp 的范围内有推测的类似原核生物的启动子序列(?10 区: TAAAAT、?35 区: TTGAAA); 3′非翻译区序列长 474bp, 在距离转译终止密码子 TAA 下游54—98bp 处有一段较长的回文序列, 可形成一个 22bp 的茎结构。密码子偏好性分析结果表明, 长石莼(缘管浒苔)rbcL 基因偏向使用第三位核苷酸碱基为 A 和 T 的密码子。