Site-directed Mutagenesis of Putative Adenylylation Site of Glutamine Synthetase and Glutamine Production
谷氨酰胺合成酶腺苷酰化位点的定点突变和产胺的初步研究

为解决谷氨酰胺合成酶腺苷酰化修饰失活的问题,利用基因定点突变的方法将谷氨酸棒杆菌的谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase,GS)腺苷酰化位点由Tyr405突变为Phe405,并在大肠杆菌中获得突变后GS的表达-对比腺苷酰化位点突变前后的重组大肠杆菌pET-3a/GSI和pET-3a/GSIM在高氨环境下的GS活性和谷氨酰胺产量,发现重组菌pET-3a/GSIM在高氨环境下的最大酶活是150 U/L,产谷氨酰胺浓度为17.5 g/L,分别是pET-3a/GSI酶活(30 U/L)的5-0倍和产谷氨酰胺水平(3-4 g/L)的5-1倍,GS定点突变使谷氨酸转化为谷氨酰胺的途径得到强化-