Simulation of Bone Marrow Hematopoiesis Using Perfusion Culture in the Membrane of Hollow Fibers
中空纤维灌注培养模拟骨髓造血研究

目的：采用细胞工程技术探索造血细胞体外扩增技术以维持其自我更新潜能，抑制过度分化。方法：首先建立微载体-基质细胞体外造血模型（G1组，即瓶培养模式），设置单纯微载体．基质细胞培养（G2组）和单纯骨髓细胞液体悬浮培养（G3组）作对照。检测各组粒系．巨噬系造血祖细胞集落产率（CFU-GM/10^5）。自行设计1对引物，以检测Balb／c小鼠原始造血细胞c-kit基因mRNA表达水平。试用中空纤维模拟血管灌注功能（Gh组，即中空纤维灌注模式），以G1、G2、G3作对照，并对各组培养效果进行评价。结果：微载体-基质细胞体外造血模型实验结果显示：小鼠骨髓细胞培养2周后，CFU-GM/10^5检测G1组比G3组高7．7倍（P〈0．05），是2个对照组（C2＋C3）集落产率总和的1.9倍。原始造血细胞c-kit mRNA表达水平：模型G1组比G2组高3．7倍，比G3组高62．3倍，且差异均显著。在成功建立微载体．基质细胞体外造血模型基础上进行中空纤维灌注培养实验，CFU-GM/10^5检测显示：Gh组比G3组高4．6倍，并且略高于G2组；Gh组与G1组集落产率差别不明显。在原始造血细胞c-kit mRNA表达水平上Gh组最高，从Gh、G1、G2到G3依次呈下降趋势。结论：在没有外加细胞因子的条件下，微载体．基质细胞和中空纤维灌注造血模型可抑制造血干、祖细咆过度分化与耗竭，维持其c-kit较高的表达水平。