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中国生物工程杂志 2008
loning, expressing and analysis of biological function of HP0527-C of type IV secretion system in Helicobacter pylori
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Abstract:
为克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC 11637 hp0527-c基因,探讨其生物学功能.设计引物扩增,T-A克隆,测序正确后构建表达载体pET-28a-hp0527-c,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后以Ni2 -NTA柱获得纯度为98%重组蛋白.经Western blot鉴定正确后,免疫新西兰大白兔获得了较高滴度的多克隆抗体;将重组蛋白作用于BGC-823细胞,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达增高;同时用MTT法来检测重组蛋白对细胞增殖的影响,结果表明其活性呈现一定量的时间和剂量依赖性.已成功克隆了HP0527-C的重组蛋白,初步探讨了其与细胞之间的相互作用,为进一步阐明H.pylori致病机制奠定了基础.
