Modification of Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor To Reduce Oligomers Formation
减少寡聚体形成的重组人碱性成纤维细胞生长因子的改造

采用PCR突变技术改造人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)cDNA，将扩增的cDNA片断插入表达载体pET3c的表达框架中，构建了表达菌株BL21(DE3)／pE33c-Ser69，87]hbFGF，用IPTG诱导表达，其Se^69，87]hbFGF的表达量占菌体总蛋白30％。通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法获得了纯度达98％的Se，^69，87]hbFGF样品。用MTT法测得纯化的Ser^69，87]hbFGF样品与野生型hbFGF促Balb／c 3T3细胞增殖的比活性相当。以野生型hbFGF作对照，分析反复冻融对突变体Ser^69，87]hbFGF形成寡聚体的影响，并在25℃和37℃的条件下分析其寡聚体的形成情况。结果表明，不管是反复冻融还是在25℃和37℃的条件下，突变体Se^69，87]hbFGF形成的寡聚体都较野生型hbFGF明显减少。