Establishment of in vitro Src tyrosine kinase inhibitors screening model
体外Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂筛选模型的建立

在体外构建一个以Src蛋白为靶位点的蛋白酪氨酸激酶抑制剂快速筛选模型,为筛选Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂奠定基础.基因工程表达GST-v-Src蛋白,收集包涵体蛋白,并经变性复性处理.以生物素化的聚Glu∶Tyr(4∶1)为激酶反应底物、以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的磷酸酪氨酸特异性单克隆抗体(HRP-PY20)检测磷酸酪氨酸残基的酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定获得蛋白的激酶活性,并进行抑制剂筛选.该模型具有靶向性强、快速、简便可行、高通量的特点.用该方法对6种治疗肿瘤配方中常用的中草药进行筛选,筛选出3种中草药水煎剂富含Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂成分.