Calibration of a suitable enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) for Nilaparvata lugens (stl) antigen detection
褐飞虱抗原检测最佳ELISA条件的建立

应用褐飞虱单克隆抗体3B2和4B8比较了直接、间接和多种抗体夹心ELISA方法。结果表明：当拟环纹豹蛛稀释512倍（含拟环纹豹蛛0.04mg/mL）时，直接和间接ELISA的OD值比阳性对照仍降低5％以上。而当捕食者稀释100倍时，对同种单抗、异种单抗和两种单抗混合夹心ELISA检测OD值的影响均小于5％。在加入100倍豹蛛稀释液时，3种抗体夹心ELISA检测灵敏度均为16.90ng/mL（1／17509头褐飞虱雌成虫），直接和间接ELISA分别为：67.59ng/mL（1／4378头）和135.18ng/mL（1/2189头）。建立了4B8稀释100倍（28.13μg/mL)，捕食者匀浆液定容至1mL／头后再稀释100倍，HRP－4B8稀释4000倍（1.04μg/mL）的夹心ELISA用于检测捕食者肠道中的褐飞虱抗原。在此系统下，检测灵敏度为每头拟环纹豹蛛含1.69μg猎物蛋白（1／175头褐飞虱雌成虫），非目标抗原的影响小于5％。