Prokaryotic expression ofβC1 gene of DNAβ satellite associated with Tobacco curly shoot virus and preparation of monoclonal antibodies against its protein
与烟草曲茎病毒相伴随的DNAβ的βC1基因原核表达及蛋白的单抗制备

将PCR扩增的烟草曲茎病毒(Tobaccocurly shoot virus,TbCSV)Y35分离物βC1基因克隆到pET-32a原核表达载体,构建原核表达重组载体pET32a-Y35βC1.重组载体导入大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导、Ni2 NTA亲和柱纯化获得与硫氧还蛋白融合的重组蛋白Y35βC1.以Y35βC1重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤细胞技术制备了9株能够稳定传代并分泌抗Y35βC1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别制备它们的单抗腹水.9株单抗腹水的间接ELISA效价在10-5~10-6之间.Y35βC1单克隆抗体的研制为该蛋白的亚细胞定位及功能研究,明确Y35βC1基因在致病过程中的作用机理奠定了基础.