神经酰胺以Caspase依赖和非依赖方式诱导 线粒体凋亡蛋白释放

本研究探讨了外源性C2-神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡中,线粒体膜间隙凋亡蛋白的释放机制.不同浓度C2-神经酰胺作用HT-29细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位(△Ψm),线粒体/细胞液分离试剂盒分离亚细胞成分,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞色素C(Cytc)、高温必需蛋白A2(HtrA2)、线粒体源性半胱天冬氨酸蛋白酶第二活化因子(Smac)、凋亡抑制蛋白(XIAP)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平.实验结果显示25和50μmol/LC2-神经酰胺作用细胞6h,△Ψm即开始下降(P<0.05),且环孢霉素能通过调节线粒体膜通透性转换孔抑制△Ψm的下降.C2-神经酰胺对Cytc,HtrA2和Smac总蛋白表达没有明显影响,但能诱导Cytc,HtrA2和Smac从线粒体释放入细胞液中,并下调XIAP蛋白的表达及活化Caspase-3.在Caspase抑制剂存在下,C2-神经酰胺仍能诱导Cytc和HtrA2从线粒体释放,但不能诱导Smac释放.因此认为C2-神经酰胺能通过线粒体凋亡通路诱导HT-29细胞凋亡,C2-神经酰胺诱导Cytc和HtrA2从线粒体的释放是Caspase非依赖性的,而Smac释放是Caspase依赖性的.