家蚕五龄幼虫后部丝腺细胞EST的测定和基因表达谱分析

以C108蚕品种五龄第1天和第5天的后部丝腺为材料,依靠EST分析探讨了有关后部丝腺细胞合成分泌丝素蛋白基因的表达调控问题.研究结果发现,测得的9948条EST序列,经序列拼接分析得到2861个一致性序列,其中,重叠的EST群有911个,单条序列有1950个;被注释的一致性序列达1335个,未被注释的一致性序列达1526个;55.89％,共5560条与Mita等人发表的家蚕后部丝腺细胞EST没有同源性;五龄第1天得到的重叠的EST群数和单条序列数都要比五龄第5天的多约1倍;重叠的EST群组成大小大于50的基因仅占所有一致性序列的0.5％左右,基因表达的频率开差非常大,主要表达的基因是与丝素组成和丝素分泌合成有关的基因;五龄第5天基因表达量与第1天相比,丝素重链基因高18倍,丝素轻链基因高9倍,丝素P25基因高8倍;经功能注释分析,被赋予担负细胞组分功能的基因达508个,担负酶功能的基因达315个.结果暗示了五龄第1天的基因表达除了作用于丝腺细胞的生长外,主要是为丝素蛋白合成分泌作准备,五龄第5天的基因表达主要是合成分泌丝素蛋白;H链、L链和P25蛋白实际可能并没有按6:6:1比率构成复合体,或H链结构特殊,不易通过EST技术检测到.在2861个基因中将有相当部分基因参与丝素蛋白的合成与分泌,说明家蚕后部丝腺细胞合成、分泌丝素蛋白这一生命过