斜纹夜蛾普通气味结合蛋白ⅡcDNA的克隆及在原核细胞中的表达

采用同源克隆结合RACE的方法克隆了斜纹夜蛾的普通气味结合蛋白Ⅱ(SlGOBPⅡ)的cDNA序列(GenBank登录号为EU086371).序列分析表明,SlGOBPⅡ可读框序列为489bp,编码162个氨基酸,分子量为18.2kD,等电点为5.72.SlGOBPⅡ具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中具有6个保守的半胱氨酸残基,呈酸性.SlGOBPⅡ氨基酸序列与草地贪夜蛾(S.frugiperda)和甜菜夜蛾(S.exigua)的气味结合蛋白具有较高的同源性.RT-PCR和Northern blot检测表明,SlGOBPⅡ具有触角组织表达特异性.将SlGOBPⅡ,克隆到表达载体pET-32a上,阳性重组子转化表达宿主菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行了高效表达.SDS-PAGE检测表明SlGOBPⅡ在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为32.0kD的可溶性融合蛋白,Western blot分析表明表达产物能与Ni-NTA螯合物特异性结合,表明表达的SlGOBPⅡ为N端带有6His标签的融合蛋白.利用Ni2 -NTA亲和柱进一步纯化了SlGOBPⅡ,以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗SlGOBPⅡ的抗血清,ELISA滴度为1∶12800,Western印迹检测结果显示,SlGOBPⅡ抗血清与表达的融合蛋白呈阳性反应,表明所表达的融合蛋白仍保持原有蛋白的免疫原性.