MRP1活性与其NBDs结构域构象变化的相关性

用专一性标记蛋白分子中半胱氨酸(Cys)的荧光探针MIANS标记MRP1(multidrugresistanceprotein)的实验结果表明,MIANS与MRP1中的2个Cys结合,结合后不仅荧光强度增加,而且发射波长蓝移,表明所标记的位点处于相对疏水的环境.荧光共振能量转移实验进一步表明,MIANS标记的Cys与MRP1核苷酸结合结构域(NBDs)很接近,其中1分子MIANS标记在NBD1附近,另一分子标记在NBD2附近.ATP,ADP以及化疗药物能阻止MIANS对MRP1的标记.猝灭剂丙烯酰胺、Cs+和I-对MIANS-MRP1荧光猝灭实验又表明,MIANS标记的Cys位点处于一个带正点电荷的区域.同时,巯基结合试剂MIANS和NEM对MRP1ATP酶的活性具有明显的抑制,而化疗药物却有明显的激活作用.上述实验结果提示,核苷酸和化疗药物都能引起MRP1的NBDs的构象变化,核苷酸可直接与NBDs结合,而化疗药物可能通过改变MRP1的跨膜结构域(TMDs)的构象进而影响NBDs的构象,从而调控MRP1ATP酶的活性并影响对化疗药物的转运.结果对于深入揭示MRP1的ATP的结合和水解与其转运化疗药物之间的偶联提供了较直接的实验证据.