一个光合组织特异表达强启动子的分离及功能分析

用接头PCR技术克隆了长度为1415bp的PNZIP基因启动子,该启动子具有真核生物启动子的典型特征,引物延伸实验证明转录起始位点位于翻译起始位点上游122bp处。根据PNZIP基因启动子的序列特征,利用PCR技术对该启动子进行了有目的的缺失,将5个长度不同的启动子片段分别与报告基因GUS相连接,构建植物表达载体,转化烟草。荧光定量检测结果表明:5个不同长度的PNZIP启动子均能驱动GUS基因在光合组织中专一表达,它们的活性随着启动子5′端的逐步缺失而不断地下降;在叶片组织中长度为1415bp的PNZIP启动子活性比35S启动子高9倍;PNZIP启动子中存在2个可能与光合组织特异表达有关的新的顺式作用元件,即GAAATA和GATACT,GATACT元件可能决定基因的光合组织特异性表达,而GAAATA可能作为增强子提高基因在光合组织的表达强度。