人类组织特异性DNA聚合酶POLλ2基因的克隆、表达纯化和鉴定

发现并克隆了一个肝脏特异的人类DNA聚合酶基因,是POLλ的一个剪接体,命名为POLλ2.该剪接本的cDNA长2206bp,包含一个1452bp的开放阅读框,编码482个氨基酸,位于人10号染色体长臂24区,长约7.9kb,包含8个外显子和7个内含子.生物信息学分析表明,POLλ2蛋白和DNA聚合酶X家族成员高度同源,并含有这个家族特有结构域POLx,因此是一个DNA聚合酶X家族的新成员.该剪接本的核苷酸序列和相应蛋白质氨基酸序列已提交至GenBank,登录号为AY302442.亚细胞定位实验证实,POLλ2蛋白定位于细胞核;人16种组织表达谱实验表明,POLλ2在肝组织和睾丸组织中特异性高表达,在卵巢组织中低表达,而在其他组织中没有检测到表达.癌和癌旁表达实验表明,与正常肝组织和癌旁组织相比,在15个肝癌组织的样本中有80%样本的POLλ上调表达,导致POLλ2和POLλ的mRNA分子的比例异常,可能和肝癌的病理过程有关.通过筛选菌株,E.coli BL21(DE3)CONDON Plus可以高效地表达可溶性POLλ2蛋白;通过Ni-NTA resin和Superdex-75纯化了POLλ2重组蛋白.经过同位素α-32P-dCTP掺入实验,证实了POLλ2具有DNA聚合酶活性.