家兔(Oryctolagus curiculus)角膜内皮细胞系的建立

为了建立兔角膜内皮(RCE)细胞系,以家兔角膜为实验材料对RCE细胞的体外培养及其细胞系的建立进行了研究.取活家兔角膜,采用内皮面朝下进行贴板培养,并利用时间梯度连续揭膜法筛选出仅含有纯净RCE细胞的培养孔,收集纯一的RCE细胞悬浮于含有硫酸软骨素氧化降解物、牛眼生素、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、家兔角膜基质细胞培养液、羧甲基壳多糖、N-乙酰葡萄糖盐酸盐和氨基葡萄糖盐酸盐的DMEM/F12培养液(20%胎牛血清)中,置CO2培养箱中启动原代培养.启动培养的RCE细胞呈四角形或多角形,3周后即可长成单层.在随后的继代培养中,RCE细胞的形状逐渐由多角形变为成纤维样.RCE细胞生长状态稳定,现已被传至67代,已经建成了一个新的连续性RCE细胞系.经鉴定,该细胞系细胞的群体倍增时间约为53.8h;第67代培养细胞的特征性染色体数目为44条,但出现了染色体的非整倍性.综合特征性染色体数目、抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体的免疫细胞化学染色、血管内皮生长因子(VEGF165)实验和形态回复实验的研究结果,证明该细胞系确为家兔角膜内皮细胞系,为哺乳动物角膜内皮细胞的理论研究及人造角膜内皮的研制奠定了基础.