Optimization for DDRT-PCR System of Racomitrium japonicum Using Orthogonal Design
正交设计优化东亚砂藓DDRT-PCR反应体系

利用正交实验设计L25(56)对东亚砂藓(Racomitrium japonicum)DDRT-PCR反应体系的6因素(Mg2+、dNTP、锚定引物、随机引物、模板DNA、Taq酶)在5个水平上进行优化实验.结果筛选出各反应因素的最佳体系(20 μL)为:Mg2+ 2.25 mmol/L、dNTP 0.4 mmol/L、锚定引物 1.0 μmol/L、随机引物 0.7 μmol/L、模板DNA 1.6 μL、Taq酶 2.5 U.对东亚砂藓DDRT-PCR最佳反应体系进行梯度PCR引物退火温度筛选,得到的最佳退火温度为 45.4℃.该优化体系的建立,为进一步进行东亚砂藓抗旱基因的筛选与克隆等一系列分子研究提供了重要参考依据.