Transient expression of Aeromonas hydrophila HBNUAh01 outer membrane protein A gene in tobacco leaf cells
嗜水气单胞菌HBNUAh01 外膜蛋白A 基因在烟草叶片细胞中的瞬时表达

摘要:【目的】从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)HBNUAh01 中克隆外膜蛋白A (outer membrane protein A，ompA)基因并在烟草(Nicotiana tabacum)叶片细胞中瞬时表达该蛋白。【方法】以嗜水气单胞菌HBNUAh01 为模板进行嗜水气单胞菌外膜蛋白A(AhompA)基因片段的PCR 扩增，并将其克隆到pEASYBlunt Simple 载体中以进行测序。测序正确的AhompA 基因序列与含有黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein，YFP)基因的表达载体pCAMBIA1300 构建重组表达载体。将该重组表达载体转化到农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101 感受态细胞中，随后用阳性转化子转染烟草叶片细胞。使用激光扫描共聚焦成像系统(Confocal Laser Scanning Microscope)检测观察融合表达AhompA 基因的黄色荧光蛋白并采用RT-PCR 检测AhompA 基因在烟草叶片中的转录情况。【结果】从嗜水气单胞菌HBNUAh01中克隆出大小为1032 bp 的AhompA 基因序列，并在烟草叶片中成功表达AhompA 和YFP 的融合蛋白。【结论】AhompA 基因在烟草叶片细胞中的成功表达为进一步研究利用植物疫苗防治嗜水气单胞菌引起的水产动物疾病奠定了基础。