荧光发光杆菌TT01品系pirA2B2 基因的克隆表达与杀虫活性

摘要:【目的】Photorhabdus luminescens TT01 基因组中的一对ORF plu4437-plu4436 (简称pirA2B2)的预测氨基酸序列与另一对已证明编码产物有口服杀虫活性的ORF plu4093-plu4092(简称pirA1B1)有50% 和45% 的一致性，本文旨在研究pirA2B2 基因座的表达产物是否也有杀虫活性。【方法】PCR 扩增并克隆了pirA2，pirB2和pirA2B2 基因，构建了重组表达载体pQE-pirA2，pQE-pirB2 和pQE-pirA2B2 并分别转入M15 菌株表达，经SDSPAGE和Western blot 检测证明，3 个重组菌株经IPTG 诱导后，分别成功表达了可溶的PirA2，PirB2 和PirA2B2蛋白。用亲和层析结合脱盐技术对3 个重组菌株表达的外源蛋白分别进行纯化，并通过生物测定确定纯化蛋白的杀虫活性。【结果】生物测定结果显示联合表达的PirA2B2 对大蜡螟和斜纹夜蛾五龄幼虫均有明显的血腔杀虫活性，LD50 分别为每虫4. 0 和2. 8 μg，单独表达的PirA2 或PirB2 对上述2 种害虫没有血腔杀虫活性，但两者的混合物具有与两者联合表达相似的杀虫活性;PirA2B2 对大蜡螟和斜纹夜蛾初孵幼虫均无口服杀虫活性。【结论】pirA2B2 是P． luminescens TT01 菌株基因组中的另一个二元杀虫毒素基因。【意义】pirA2B2 的成功克隆表达和杀虫功能的确定为进一步研究其与pirA1B1 的关系以及该基因的表达调控等打下了基础。