Constructing duplication hasABC of chromosome recombinant in Streptococcus equi subsp. Zooepidemicu
构建无抗性标记双拷贝透明质酸合成酶基因工程菌

摘要:【目的】探讨一种构建无抗生素选择标记链球菌透明质酸合成酶基因工程菌的方法。【方法】PCR 扩增链球菌透明质酸合成酶操纵子hasABC 基因，用温度敏感载体pJR700 构建携带hasABC 基因重组质粒pXL32;电转化pXL32 质粒到马链球菌兽疫亚种感受态细胞，卡那霉素(Kanamycin，kan)平板37℃培养筛选重组子，在不含kan 液体培养基中30℃传代，37℃平板分离挑取抗生素敏感菌落，RT-PCR 检测工程菌染色体hasABC 基因表达，Bitter-Muir 法测定菌体透明质酸含量。【结果】在无抗生素选择压力条件下，获得透明质酸产率提高34% 的马链球菌兽疫亚种透明质酸合成酶基因工程菌。【结论】用pJR700 温度敏感载体系统，构建能提高透明质酸产量的无抗生素选择标记的基因工程菌是可行的。