Cloning and characterization of gene cluster for biosynthesis of ectoine and 5 -hydroxyectoine from extreme halotolerant actinomycete strain Prauserella alba YIM 90005T
极端耐盐放线菌白色普氏菌YIM90005T四氢嘧啶及5-羟基四氢嘧啶合成相关基因的克隆

摘要：【目的】 为了研究耐盐放线菌对高盐环境的适应机理。【方法】 用HPLC定量检测了极端耐盐、丝状产孢放线菌——白色普氏菌（Prauserella alba） YIM 90005T在不同盐浓度下胞内相容性溶质的种类和含量。【结果】 结果发现，四氢嘧啶和5-羟基四氢嘧啶是其主要的相容性溶质。在培养基NaCl浓度为10%时，四氢嘧啶在胞内累积浓度最大，为18.77 μg/mg干菌体重。之后随NaCl浓度的升高，胞内的四氢嘧啶含量逐渐减少，而5-羟基四氢嘧啶的含量逐渐增加，在该菌耐受的最高NaCl浓度下（24% w/v），胞内5-羟基四氢嘧啶含量达到最大值，为22.98 μg/mg干菌体重。设计兼并引物，利用染色体步移，克隆得到四氢嘧啶及5-羟基四氢嘧啶合成相关基因ectABCD。序列分析表明，ectABCD位于一个操纵子中。进一步对不同NaCl浓度培养条件下ectB,D的表达量进行定量分析，结果表明该基因簇表达量随着培养基中NaCl浓度的增加而增大。【结论】 研究结果证实5-羟基四氢嘧啶是P. alba YIM 90005T在极高盐浓度条件下起渗透调节及保护的相容性溶质。