High efficient gene knockout in Verticillium dahliae
高效大丽轮枝菌(Verticillium dahliae) 基因敲除体系的构建

摘要:【目的】为了深入研究大丽轮枝菌(Verticillium dahliae) 致病基因的功能，构建高效大丽轮枝菌基因敲除体系。【方法】融合PCR 构建基因敲除载体;利用农杆菌介导法转化大丽轮枝菌;使用在T-DNA 之间加入致死基因的双元载体，使T-DNA 随机插入转化子在添加5-氟脱氧尿苷的培养基上不能存活，实现对随机插入转化子的“反向筛选”。【结果】对大丽轮枝菌腺嘌呤合成酶基因和几丁质合成酶基因进行基因敲除验证，基因敲除转化子在总转化子中的比例分别达到87% 和44%。【结论】成功构建大丽轮枝菌高效