Purification and characterization of ferulic acid esterase from Penicillium citrinum
来自桔青霉的阿魏酸酯酶的分离纯化、理化性质

摘要：【目的】从桔青霉的发酵液中分离纯化了胞外阿魏酸酯酶(PcFAE)并进行了酶学性质的研究，初步探讨了PcFAE对麦糟的酶解作用。【方法】利用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水层析纯化得到电泳纯的阿魏酸酯酶。【结果】从该菌株的发酵液中获得一阿魏酸酯酶，该酶亚基分子量约为31 kDa，全酶分子量约为58 kDa。其最适pH为6.0，最适温度为45℃－65℃，在pH 5.0-6.0及25℃－55℃之间，酶保持了较好的稳定性。Mg2+、Fe2+、Mn2+、 Ca2+和Na+对酶活有一定的促进作用，Zn2+对PcFAE酶活有一定的抑制作用，而 Cu2+、亮抑肽素、抑肽酶有显著的抑制作用， Hg2+、苯甲基磺酰氟几乎完全抑制了酶活。EDTA 对PcFAE活性无明显影响。PcFAE的kcat/Km对香豆酸甲酯、芥子酸甲酯、阿魏酸甲酯、咖啡酸甲酯的值分别为823、416、103、0，PcFAE对MpCA的催化效率最高。PcFAE作用于麦糟，当5 U PcFAE/g麦糟时，其阿魏酸的释放量为7.2%。【结论】获得了一阿魏酸酯酶，其理化性质与至今报道的阿魏酸酯酶有所不同，为阿魏酸酯酶的开发提供了重要的实验依据。