Characteristics of chitinase B from Bacillus thuringiensis and its potential in antagonism and insecticidal enhancing effects
苏云金芽胞杆菌几丁质酶B特性及其杀虫抑真菌的作用

摘要：【目的】本文对苏云金芽胞杆菌科默尔亚种15A3菌株（Bacillus thuringensis subsp.colmeri 15A3，简称Bt 15A3）几丁质酶B（chitinase B，简称ChiB）的特性及其杀虫抑真菌作用作了初步研究。【方法】将大肠杆菌（Escherichia coli）中表达的Bt 15A3菌株的ChiB，经过硫酸铵沉淀、透析、Sephadex G-200凝胶层析，最终得到初步纯化的几丁质酶。利用酶谱方法确定分子量，并且对2种分子量的酶蛋白进行了质谱鉴定。对各种金属离子对ChiB酶活的影响、最适反应温度及pH、温度及pH稳定性等理化特性进行研究，并且测定了ChiB抑制真菌孢子萌发的活性和对甜菜夜蛾和棉铃虫的杀虫增效作用。【结果】ChiB分子量约为70 kDa。同时证明检测到的64 kDa蛋白为70 kDa蛋白C端的降解产物。ChiB最适作用温度为60 ℃，最适pH值为5，在温度20 ℃～60 ℃和pH 4-8的范围内均有良好的稳定性。供试金属离子中Fe3+对ChiB的酶活有促进作用，Zn2+，Ag+有抑制作用。ChiB可抑制产黄青霉等真菌孢子的萌发，半抑制浓度（median effective inhibitory concentration，IC50）约为4 μg/mL。该酶可以分别降低Bt晶体蛋白对甜菜夜蛾和棉铃虫的半致死浓度（median lethal concentration，LC50）26 %和30 %。【结论】Bt科默尔亚种的几丁质酶不但具有较稳定的理化性质，而且具有抑制真菌生长及明显的杀虫增效作用。