单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏、激活细胞模型建立

摘要【目的】 建立单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）潜伏感染人神经母细胞瘤细胞株 SH-SY5Y及激活的细胞模型。 【方法】 分别加入20，40，60，80，100，120，140 μmol/L的阿昔洛韦（ACV），观察对SH-SY5Y细胞生物性状的影响；在ACV存在的情况下，分别将含有0.1、1、10、100 MOI的病毒液接种SH-SY5Y细胞，运用相差显微镜观察病毒对细胞的影响，确定潜伏的建立；分别用41℃、42℃、43℃、44℃、45℃加热0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h，观察加热时间及温度诱导HSV-2在SH-SY5Y细胞中激发的最适条件；加入25、50、75、100、125 μmol/L福斯高林(Forskolin)诱导病毒在细胞中激活，探讨诱导的最佳浓度；对HSV-2在SH-SY5Y细胞中的潜伏及激发进行验证并测序；运用相差显微镜观察病毒激活后细胞形态的变化。【结果】60 μmol/L ACV的存在最适合HSV-2在SH-SY5Y细胞中建立潜伏状态；1-10 MOI的感染量均能取得较好的病毒潜伏及激发效果；通过观察，病毒在SH-SY5Y细胞中最长可潜伏14 d；43℃，1.5 h及75 μmol/L Forskolin均为诱导病毒潜伏激发的最佳条件；相差显微镜观察病毒激发后细胞病变，从24 h到72 h，细胞变性、坏死的程度、数量随感染时间延长而增加；HSV-2 LAT、gG基因PCR扩增及电泳结果，证实病毒在细胞中的潜伏及激活。【结论】 初步在人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y上建立了HSV-2潜伏感染及激活的细胞模型，为下一步研究HSV-2的潜伏与激发机理，了解HSV-2的致病机制打下基础。