黄地老虎颗粒体病毒DNA的基因文库和物理图谱

利用EMBL 4——携带多切点连接序列的λ取代载体，建成了黄地老虎颗粒体病毒(AsGV)DNA基因文库，并绘制出AsGV DNA基因组的物理图谱。当体外包装效率达3 x 104pFU／μg DNA时，Sal和BamHI烈酶完全酶切的EMBL 4和BamHI部分酶切的AsGV DNA，按2：1的接头克分子比，用T4连接酶连接后，在BHB2688与2690体系中进行体外包装，再经在L95和ED 8654中的转染和转导，获得1．5×103噬菌斑。根据Clarke和Carbon公式，筛选概率达到复盖99％的AsGV基因组只需35个重组噬菌斑。我们随机挑取了35个重组噬菌斑，经快速琼脂糖凝胶电泳分析得到13个不同类型的重组噬菌斑，以32P标记的AsGV DNA为探针进行分子杂交，确定了BamHI在AsGV DNA基因组上位点的相邻位置。