腐蹄病致病因子节瘤拟杆菌蛋白酶在大肠杆菌中的高效表达及其启动子分析

节瘤拟杆菌是羊腐蹄病的主要致病因子，它能产生细胞外蛋白酶。本文所报道的是其中的一种蛋白酶(40 kDa)基因的亚克隆、在大肠杆菌中的高效表达以及N-末端多肽序列。用Spbl+ScaI酶切原克隆(插入片段约为15kh)，鸟枪法克隆于pTZ18R载体，用免旋学方法筛选其亚克隆文库，并用SDS／聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其表达。然后纯化其亚克隆DNA片段，用Sau3A1消化，克隆于pKK232-2启动子选择载体，进行启动子的分离和分析。用分光光度计方法定量测定CAT(氯霉素乙酰转移酶)活性，从而确定其启动子的强弱。