苏云金芽孢杆菌以色列亚种130kd杀蚊蛋白基因的克隆与鉴定

以人工合成的130kd杀虫蛋白基因的18—base序列为探针，通过SoutherD分子杂交，验证了在Bacillus thuringiensis var.israelensis 4Q5菌株75Md质粒上含有130kd杀蚊蛋白基因，并且证明了提纯的晶体蛋白具有杀蚊幼虫活性。对该质粒进行HindIII完全酶切，以pUCl8为载体，以E．Coli TG1为受体，得到四个与探针有强杂交信号的阳性克隆，其中两个(pFH2，PFH4)含有5．2kb HindIII插入片段，包含第一类130kd杀蚊蛋白基因；另两个(pFHI，pFH3)含有2．3kb HindIII插入片段，包含第二类13 0kd杀蚊蛋白基因的3'部分。pFH2和pFH4中，第一类130kd杀蚊基因的插入方位不同。