Synthesis of Human Neurotrohin-3 Gene and Its Expression in Pichia pastoris
神经营养素-3基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达

根据人神经营养素3（Human neurotrohin3，hNT3）的基因序列，把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母（Pichia pastoris）偏爱的形式，设计了10条36～59nt的寡聚核苷酸引物，通过5次连续PCR反应，获得了人工合成的NT3 cDNA片段（简称NT3b基因）。将合成的NT3b基因克隆到pPIC9K质粒上，获得重组表达载体pPIC9KNT3b。将重组表达载体pPIC9KNT3b和pPIC9KhNT3分别电击转化宿主毕赤酵母GS115菌株，经筛选得到重组转化子。不同转化子经甲醇诱导，表达产物进行SDSPAGE检测、Western blot检测和ELISA分析，结果表明，NT3b基因和hNT3基因成功获得分泌性表达，从整体水平上，使用偏爱密码子的NT3b基因在毕赤酵母GS115菌株中的表达明显优越于hNT3基因(x2=4.334,P<0.05)，表达量在诱导后72～96h最高，达到31mg/L左右。