Cloning and Characterization of a Carboxylic Transport Protein JEN1 and Its Upstream Sequence from Beauveria bassiana
球孢白僵菌羧基转运蛋白基因BbJEN1及其上游序列的克隆与分析

在分析一株球孢白僵菌TDNA插入突变体T12的Tagging序列的基础上，根据与其具有高度同源性的一条金龟子绿僵菌EST序列（编号为AJ273226）设计简并引物，用YADE法从球孢白僵菌中扩增出该EST的同源序列及其延伸序列。序列分析表明，该片段与粗糙脉孢霉的羧基转运蛋白JEN1具有高度同源性，由此确定该序列为球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1基因的部分序列。然后利用YADE法延伸扩增该序列的上、下游序列，获得球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1的全长DNA序列，命名为GBbJEN1。利用3′RACE扩增出球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1的cDNA序列，命名为BbJEN1。BbJEN1全长1656bp，编码514个氨基酸的蛋白。推测蛋白分子量为55975.37Da，等电点9.32。氨基酸序列与金龟子绿僵菌、粗糙脉孢霉和酿酒酵母羧基转运蛋白JEN1的同源性分别为77%、66%和30%。序列分析表明，GBbJEN1含有2个内含子。Southern杂交表明，GBbJEN1基因在球孢白僵菌基因组中为单拷贝。利用RTPCR法对BbJEN1的表达特性进行了分析，结果发现BbJEN1基因的转录受蟑螂壳、蝉蜕等昆虫体壁的诱导，受葡萄糖的抑制。进一步利用YADE法获得了长为977bp的GBbJEN1上游序列，其中含有可能的葡萄糖抑制调控序列和压力反应元件。