Construction of Thymidylate Synthetase Deficient(thyA) E.Coli Strain
大肠杆菌胸腺嘧啶合成酶thyA缺失突变菌株的构建

大肠杆菌K12 DY330菌株的染色体上整合有一种新型的同源重组系统——缺陷型λ原噬菌体同源重组系统。以DY330为出发菌，通过同源重组构建大肠杆菌thyA-株DY330TI，其基因组特点是：thyA基因除保留N端的1～49氨基酸残基相对应的必需核苷酸序列外，将其余部分全部缺失；此外，还敲除了DY330TI中与缺陷型λ原噬菌体同源重组功能相关的基因，从而尽可能避免了通过同源重组产生回复突变的可能性。通过大肠杆菌thyA基因对该突变株的转化实验，检测转化子的回复突变率，进一步证实该突变株的突变性状稳定，为构建以thyA为选择标志的大肠杆菌染色体质粒平衡致死系统提供了合适的缺陷型宿主菌。