Construction of an aiiA-expressing Vector and Its Expression in Pichia pastoris
aiiA基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达

构建携带N-酰基高丝氨酸内酯酶基因(aiiA)的重组毕赤酵母表达载体pPIC3.5K-aiiA, 采用电转化方法转入毕赤酵母GS115, 经营养缺陷型培养基、表型鉴定和高G418浓度筛选获得高拷贝表达盒的酵母转化子, 用0.5%甲醇诱导表达, RT-PCR鉴定可检测到重组酵母中编码目的基因成熟肽的mRNA, SDS-PAGE和Western blot检测结果表明, aiiA基因在毕赤酵母中成功表达, 用指示菌紫色杆菌CV026检测发现目的蛋白具有降解N-酰基高丝氨酸内酯的活性。