One-step Knockout of the ptsHIcrr Operon in Escherichia coli and Characterization of the Mutant
大肠杆菌ptsHIcrr操纵子的快速敲除及敲除菌生长性能测定

敲除大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(简称PTS系统) ptsHIcrr操纵子, 考察敲除菌株生长特性并将其与ptsG敲除菌进行比较。利用I-SceⅠ特异性切割和Red同源重组方法成功构建了大肠杆菌DH5α△ptsHIcrr敲除菌。在LB培养基中, DH5α△ptsHIcrr的生长行为与DH5α和DH5α△ptsG明显不同, 其最高菌密度是DH5α和DH5α△ptsG的近2倍, 而DH5α△ptsG生长行为与DH5α无明显差异。但在含1%葡萄糖的LB中, DH5α△ptsHIcrr 和DH5α△ptsG均表现出生长优势, 最高菌密度依次是DH5α的2.8和2倍; 培养液中最终乙酸含量分别是DH5α的12.2%、47%。在M9修饰培养基中, DH5α△ptsHIcrr比生长速率(1/h)和比葡萄糖消耗速率g/(g·h)]明显低于DH5α, 并略低于DH5α△ptsG。结果说明, ptsHIcrr操纵子敲除菌改变了葡萄糖的代谢速率, 并呈现与ptsG基因敲除菌不同的代谢特点。