Membrane transfer-based colorimetric DNA detection using enzyme modified gold nanoparticles
基于纳米金复合探针的基因芯片膜转印检测法

建立了一种基于纳米金复合探针的基因芯片膜转印核酸检测新方法。首先，用纳米金颗粒同时标记检测探针P2和两种长短不同且生物素化的信号探针 (T10,T40)，其中检测探针与靶DNA 5￠端互补，两种信号探针起信号放大作用。当靶DNA分子存在时，芯片表面捕捉探针P1 (与靶DNA分子3￠端互补) 通过碱基互补配对原则结合靶DNA分子，将其固定于芯片上，同时检测探针通过与靶DNA 5￠端互补配对将纳米金复合探针结合于芯片表面，结果在芯片表面形成“三明治”结构，后通过链霉亲和素-生物素反应，使芯片表面对应有靶DNA分子的部位结合上碱性磷酸酶，最后利用BCIP/NBT显色系统使芯片表面信号结果镜面转印至尼龙膜表面。当检测探针和信号探针摩尔比为1∶10，T10和T40摩尔比为9:1时可以检测1 pmol/L合成靶DNA分子或0.23 pmol/L结核分枝杆菌16S rDNA PCR扩增产物，检测结果通过普通的光学扫描仪读取或肉眼直接判读信号有无。本芯片检测系统灵敏度高，操作方法简单、快速，不需要特殊仪器设备，在生物分子的检测方面具有较高的应用价值。