扩展青霉碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达

将编码扩展青霉碱性脂肪酶（PEL）的cDNA克隆到酵母整合型质粒pPIC3.5K，电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，通过橄榄油MM平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDSPAGE分析、橄榄油检验板鉴定，表明扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中获得了高效表达。表达蛋白分泌至培养基中，分子量约28kD，与扩展青霉碱性脂肪酶大小一致，占分泌蛋白的95%。橄榄油检验板检验表明该表达蛋白可分解橄榄油，通过优化该表达菌的发酵条件，以橄榄油为底物进行酶活测定，其发酵液酶活可达260 u/mL。