Expression, Purification and Enzymatic Characterization of Thermus thermophilus HB8 Aspartate Aminotransferase in Escherichia coli
极端嗜热菌Thermus thermophilus HB8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究

为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶，从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC，并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达，发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0，37 ℃下在pH8～10的缓冲液中保温1 h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75 ℃，酶活稳定的温度范围为25～55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h，75℃时为2.5h。重组酶的KmKG为7.559mmol/L，VmaxKG为0.086mmol/(L·min)，KmAsp为2.031mmol/L，VmaxAsp为0.024mmol/(L·min)。Ca2+、Fe3+、Mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。