Expression of Endopolygalacturonase A of Aspergillus oryzae in Escherichia coli
米曲霉（Aspergillus oryzae）果胶酸内切水解酶（PGA）在原核系统中重组表达

果胶酶具有广阔的商业用途，在食品工业上主要用于果汁和酒类的澄清、提高植物油的提取率、提高水果的硬度和植物纤维脱胶。米曲霉（Aspergillus oryzae）一直用于传统发酵食品的生产，自然条件下其果胶酶的产量较低。文献报道的果胶酶的重组表达成功的例子较少，且活性较低。通过RT-PCR 的方法，获得不含信号肽的果胶酸内切水解酶A(polygalacturonase A, PGA) 的cDNA，PGA cDNA 连入pET-28a (+)载体, 构建 pET-28a (+)-pga 质粒。pET-28a (+)-pga 转化Turner (DE3) placⅠ细胞，得到转化子pET-28a (+)-pga-Turner (DE3) placⅠ，首次实现了米曲霉PGA在大肠杆菌系统中过表达，进一步对PGA在大肠杆菌系统中表达的条件进行了研究。在37℃、220 r/min条件培养pET-28a (+)-pga-Turner (DE3) placⅠ细胞，OD600至 0.8左右时，用500μmol/L isopropyl β-D-thiogalactogalactopyranoside (IPTG)进行诱导表达，在15℃和170r/min条件下继续培养24 h，表达效果最好，相对于每毫升培养基而言，产酶可达到70u/mL，是米曲霉自然条件产酶量的87.5倍，远优于文献报道的重组表达的PGA酶活