EFFECTS OF RECOMBINANT ADENOVIRUS OF FULL-LENGTH AND TRANCATED FORM OF TOLL-LIKE RECEPTOR 4 ON THE ORGANIZATION OF F-ACTIN IN Rf-6A ENDOTHELIAL CELLS
TLR4全长及其截断体重组腺病毒对Rf-6A细胞骨架的影响

为了研究LPS受体TLR4全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ΔTLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒对内皮细胞系Rf-6A骨架蛋白的影响，采用PCR方法扩增目的基因片段，亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中，用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体，重组腺病毒质粒经Pac Ⅰ酶切线性化后，用脂质体法转染293细胞进行腺病毒的包装扩增，用重组腺病毒感染Rf-6A细胞，采用免疫荧光标记方法观察结果。免疫荧光标记结果表明Ad-ΔTLR4明显抑制了LPS引起的细胞骨架F-actin的解聚与重排，Ad-TLR4则使LPS引起的F-actin应力纤维产生增强。以上结果说明TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染内皮细胞对LPS诱导的细胞骨架变化具有不同的影响，Ad-ΔTLR4对LPS引起的内皮细胞骨架变化具有抑制作用。