Preparation of Polyclonal Antibody and Virus-induced Tissue Expression of Paralichthys Olivaceu HRI
牙鲆HRI多克隆抗体的制备及病毒诱导的组织表达分析

血红素调节的eIF2a激酶HRI是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，在血红素缺乏和热休克等胁迫存在时，通过磷酸化底物eIF2a调控真核细胞的蛋白合成。牙鲆PoHRI是在鱼类鉴定的第一个HRI基因。PCR克隆编码PoHRI蛋白1-200氨基酸的cDNA片段，定向插入pET32a构建表达载体。IPTG诱导，随后利用Ni^2＋-NTA亲和层析柱纯化，成功获得预期大小的融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫小鼠获得抗PoHRI多克隆抗体，抗体中和实验进一步证实了抗PoHRI多克隆抗体对PoHRI蛋白的特异性识别。在健康的牙鲆组织中能检测到PoHRImRNA和蛋白的组成型表达。人工感染大鳞鲆弹状病毒SMRV诱导相应组织PoHRI的表达明显上调。结果表明，PoHRI是一种在牙鲆组织中广泛表达的蛋白，可能在抗病毒免疫反应中发挥某种功能。