重组人骨形成蛋白-3成熟肽的表达、纯化及诱骨活性的研究*

推测人骨形成蛋白-3羧基端的127氨基酸的肽段为其成熟肽(hRMP 3m)。将编码此成熟肽的cDNA插入含PL启动子的表达质粒pDH中，构建表达质粒pDH-B-3m，转化大肠杆菌DH5α。42℃热诱导6h后表达量达到最高水平，约占菌体总蛋白28％；表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后．溶解于尿素，在变性溶解状态下经阳离子交换层析，目的蛋白纯度至少在95％以上。再经稀释复性。然后将纯化、复性的重组人骨形成蛋白3成熟肽(rhBMP－3m)植入小鼠肌肉间隙，于不同时间取材观察，在局部可见典型的软骨形成、软骨内成骨以及骨组织形成的过程，证实所制备的rhBMP－3m具有明显的异位诱骨活性。