表达人γ-干扰素的重组腺病毒的制备及检测

El区缺失的腺病毒载体插入人γ-干扰素cDNA序列．与pJM17质粒通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞．经同源重组．共获得6个病毒噬斑。经PCR共扩增检测．证实这6个噬斑均为带有人γ-干扰素cDNA的重组腺病毒；受其感染的293细胞的上清中，都能洲到γ-干扰素的活性，且这种活性可被一定稀释度的兔抗人γ-干扰素多克隆抗体所中和。其中的1号重组病毒纯化后，接不同的M()I(Multiple of infection)值感染复制缺陷型腺病毒不能在其中增殖的B16F10细胞，未出现细胞病变效应(cytopalhic effect，CPE)．而上清中的γ-干扰素活性却随M()I值增大而升高，这证实构建的复制缺陷型腺病毒是能表达井分泌人γ-干扰素的。