大鼠甘氨肽酰化单氧酶在CHO细胞中的活性表达及在体外酰胺化修饰中的应用

将大鼠脑cDNA库来源的PAM基因片段，经克隆重组，构建成真核表达质粒pSV—PAM，并转染CH0细胞，获得在cHO中稳定表达活性型口α-酰胺化酶的细胞株DGAE。表达产物为双功能酶，分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。体外酰胺化加工研究表明，以α—N—acetyl－Tyr-Val-Gly为底物，该酶催化反应的Km为12．Sμmol／L，Vmax为180μmol／mg／h，而且催化反应中表现有最适铜离子浓度和pH值范围。表达的双功能酶可直接用于合成的多肽和基因工程表达产物的酰胺化加工修饰。